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动物实验:兔脑膜损伤修复实验

一、嘉美实验兔脑膜修复实验
采用硬脑膜缺损并用人工脑膜修复,观察人工脑膜修复作用。
 
二、操作步骤及方法
1、60只雄性新西兰鱼随机分成A、B和C三组,每组各18只,另6只为D组(空自对照)。将兔子固定在固定架上耳缘静脉采血5mL,之后用3%的戊巴比妥钠溶液按1m/Kg耳缘静脉注射,麻醉成功后,将兔子头部剃毛,俯卧,头固定在脑立体定位仪上,常规碘酒消毒、铺巾,而后在中线稍偏右处行2. Scm长直切口切开头皮达颅骨,暴露颅骨冠状缝的后、中线偏右6mm处,用高速电钻磨1个直径约1. 2cm的骨窗,暴露硬脑膜,用眼科剪刀剪掉右侧8mmnx 8mm大小的圆角矩形硬脑膜,人为制造出右顶部的硬脑膜缺损,注意骨窗边缘保留少许硬膜以利于硬脑膜修补,用止血海绵进行止血。将脑膜1脑膜2剪成约9mm X 9mm大小的矩形修补材料,将脑膜1和脑膜2修补于免项部的硬膜缺损区,贴合即可。A组兔用脑膜1材料进行硬脑膜缺损修复,B组兔用脑膜2材料进行硬脑膜缺损修复,C组兔不进行修复。用三角针4号丝线缝合肌层、筋膜、头皮,术后保温至麻醉苏醒后,放回笼中分开饲养,每日肌注青霉素160万u,连续三天。术后前七天,于每天上午10点对所有兔子进行体温测量,并进行记录。各组兔子饲养到预定的时间(30、90和180天),分别随机取6只兔子固定架固定,再次按原法行静脉血取样,然后空气栓塞法处死兔子,暴露出整片修补材料及外表面,以手术部位为中心,在大于手术部位0.5cm范围切取修补材料及周围的组织作为标本,使其包括修补材料及周边硬脑膜及内面的脑组织,HE染色进行病理学检查。
 
2、所有实验兔头部伤口恢复良好,创口处结痂已完全脱落,有新生毛发生长。眼睛鲜明有精神,无分泌物;被毛光泽,紧贴身体,不脱毛;肛门干净,粪便正常,不拉稀,无粘液;呼吸正常,鼻孔干净无分泌物;门齿整齐,不流口涎;耳内干净,无耳疥;脚爪短,颜色鲜红,无疥癣。30d 时间点取材发现,脑膜1和脑膜2修补材料与脑皮层组织均已经广泛粘连在一起。90d 时间点取材发现,脑膜1和脑膜2修补材料与硬脑膜已经融合在一起,部分动物脑膜修补材料与脑皮层组织也存在着粘连情况。造模后180天,兔子状态已经完全恢复,取材大体观察发现,修补材料与硬脑膜已经粘连在一起,与脑皮层组织也存在粘连情况。术后各时间点,与C组比,A组与B组实验兔血常规中白细胞、淋巴细胞绝对值和淋巴细胞百分比均无显著差异。
 
3、HE染色结果显示,材料1和材料2均呈疏松的网状结构。CK组:脑组织整体结构正常,神经元排列规则,仅可见部分脑皮层神经元核固缩; A组和B,组脑组织均可见材料脱落,2种材料在黏连程度上差别不明显。在材料内和修复侧脑皮质可见炎细胞浸润,炎细胞以中性粒细胞为主。皮质可见水肿发生,并伴有不同程度纤维增生,皮层神经元部分核固缩,可见脱髓鞘现象; C组,造模侧可见脑皮质缺失,缺失部位周围脑皮质变化如A组;从炎症发生角度来看,材料1 (A组)组脑组织随时间点延长炎症反应程度无减轻趋势,材料2(B组)组脑组织随时间点延长炎症程度有减轻趋势,C组情况趋同A组。各组未见蛛网膜增厚。
 
   
正常生活状态 30d                                       肛周观察 30d

   
A组 30d                                            B组 30d


C组 30d

   
脑膜1(硬脑膜破坏前)90d                                        脑膜1(硬脑膜切开后)90d 

   
脑膜2(硬脑膜破坏前)90d                                    脑膜2(硬脑膜切开后)90d 

   
不修补(硬脑膜破坏前)90d                                 不修补(硬脑膜切开后)90d 

   
脑膜1取材 90d                                          脑膜2取材 90d 

   
饲养 180d                                                  饲养180d

   
A组180d                                                  A组180d

   
B组180d                                                  B组180d

   
C组180d                                                  C组180d

     
材料 1X200                         材料 2X200

    
CK X 40                            CK X 200                           CK X 200

   
A-a X 40        30d                   A-a X 200        30d                  A-a X 200       30d

    
A-bX 40        60d                   A-b X 200        60d                  A-b X 200       60d

    
A-c X 40        180d                   A-c X 200        180d                  A-c X 200       180d

    
B-a X 40        30d                   B-a X 200        30d                  B-a X 200       30d

    
B-bX 40        60d                   B-b X 200        60d                  B-b X 200       60d

    
B-c X 40        180d                   B-c X 200        180d                 B-c X 200       180d

    
C-a X 40        30d                   C-a X 200        30d                  C-a X 200       30d

      
C-bX 40        60d                  C-b X 200        60d                  C-b X 200       60d

     
C-c X 40        180d                   C-c X 200        180d                 C-c X 200       180d
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