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细胞粘附能力实验案例介绍



 
试剂耗材及仪器设备:结晶紫染色液;1×PBS, 实验室常备,配方参照《分子克隆实验指南 第二版》;仪器:美国bio-rad公司酶标仪 #680

操作步骤:采用结晶紫染色法测定。将Fn和Ln用1×PBS液分别稀释成100μg/ml和200μg/ml,以每孔100μl分别包被96孔板;37℃包被2h,用1×PBS洗涤2次,再用1% BSA封闭2h。;将各组细胞按常规方法收集后用无血清培养基制成单细胞悬液,每个样本计数3次取平均数,调节细胞浓度为3×105个/ml,以每孔200μl加入包被好的培养板中,置37℃,5%CO2培养箱中孵育2h;取出96孔板,轻轻洗去未粘附的细胞,每孔用100μl 4%中性甲醛固定,30分钟后洗去;每孔加100μl 0.5%结晶紫,室温染色2h,,蒸馏水洗涤一次,阴干后每孔加入100μl 2% SDS溶液,放置酶标仪中570nm波长测定各孔OD值。

检测结果:

0h  570nm波长各孔OD值:
Ln OD值

分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.586

0.563

0.592

0.580

B

0.575

0.580

0.577

0.577

Fn OD值

分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.649

0.633

0.654

0.645

B

0.627

0.641

0.638

0.635

12h  570nm波长各孔OD值:
Ln OD值

分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.594

0.584

0.571

0.583

B

0.546

0.543

0.558

0.549

Fn OD值

分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.656

0.639

0.643

0.646

B

0.609

0.611

0.603

0.608

24h  570nm波长各孔OD值:
Ln OD值

分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.602

0.591

0.603

0.599

B

0.511

0.508

0.502

0.507

Fn OD值

分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.671

0.665

0.653

0.663

B

0.563

0.574

0.585

0.574

48h  570nm波长各孔OD值:
Ln OD值

分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.575

0.582

0.586

0.581

B

0.474

0.463

0.481

0.473

Fn OD值

分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.648

0.659

0.661

0.656

B

0.521

0.516

0.534

0.524

72h  570nm波长各孔OD值:
Ln OD值

分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.569

0.573

0.568

0.570

B

0.392

0.407

0.384

0.394

Fn OD值

分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.636

0.641

0.652

0.643

B

0.489

0.476

0.486

0.484

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