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MTT方法检测细胞毒性实验案例介绍

原理:MTT分析法以代谢还原噻唑蓝3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT)为基础。活细胞的线粒体中存在与NADP相关的脱氢酶,可将黄色的MTT还原为不溶性的蓝紫色的甲月赞(Formazan),死细胞此酶消失,MTT不被还原。 用DMSO溶解Formazan后可用酶标仪在570nm(450nm)波长处检测光密度。

操作步骤:在96孔板加入细胞100μL/孔(约1×104),置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时;加入适当浓度的受试化合物;将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间;将5×MTT用 Dilution Buffer稀释成1× MTT;每孔加50μL 1× MTT,在37℃孵育4小时,使MTT还原为甲月赞;吸出上清液,每孔加150μL DMSO使甲月赞溶解,用平板摇床摇匀;酶标仪在570nm波长处检测每孔的光密度。

结果分析:细胞存活率% =(加药细胞OD-本地OD/对照细胞OD-本地OD)×100%。注:本底OD值(完全培养基加MTT,无细胞)

0h 570nm波长各孔OD值:

实验分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.457

0.452

0.463

0.457

B

0.461

0.448

0.454

0.454

 本底

0.007

0.009

0.010

0.009

12h 570nm波长各孔OD值:

实验分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.503

0.518

0.511

0.511

B

0.494

0.501

0.489

0.495

 本底

0.009

0.012

0.011

0.011

24h 570nm波长各孔OD值:

实验分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.618

0.607

0.624

0.616

B

0.573

0.566

0.584

0.574

 本底

0.007

0.008

0.008

0.008

48h 570nm波长各孔OD值:

实验分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.744

0.765

0.738

0.749

B

0.636

0.663

0.657

0.652

 本底

0.009

0.008

0.008

0.008

72h 570nm波长各孔OD值:

实验分组

样品

平行样品

平行样品

平均值

A

0.821

0.817

0.834

0.824

B

0.701

0.724

0.695

0.707

 本底

0.013

0.008

0.009

0.010

 


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