Hi,欢迎来到嘉美实验中心
公司文化|联系我们

lab-manager@jiamay.com400-000-7401

(扫一扫关注我们)

联系我们

电 话:400-000-7401

邮 箱:lab-manager@jiamay.com

地 址:北京市昌平区中东路5号院4号楼1809

邮 编:100012

您当前所在的位置:首页 > 关于嘉美 > 技术资源 >

嘉美实验中心心血管内外科实验外包服务

1、心血管内外科的研究介绍
该学科的研究包含动脉粥样硬化、动脉硬化、心肌梗死、心力衰竭、心肌纤维化、心肌肥厚、心房颤动、心肌缺血再灌注损伤、心律失常、心肌缺血损伤、心肌病、心脏瓣膜疾病、深静脉血栓、川崎病、先天性心脏病、冠心病、心肌炎、主动脉疾病、移植等疾病的研究。
嘉美实验,14年的时间,与心血管内外科的研究者们相濡以沫,解决了一个又一个的科研难题,成为心血管病研究者们可靠的良师益友。
 
2、心血管内外科研究热门
(1) 外泌体方向
① 心力衰竭患者来源的外泌体失调破坏外泌体修复再生能力
② 外泌体介导自发性高血压大鼠外膜成纤维细胞转移ACE(血管紧张素转换酶)促进血管平滑肌细胞迁移
③ 缺血心肌靶向肽的工程化外泌体用于心肌梗死的靶向治疗
④ 外泌体从心脏微血管内皮细胞到心肌细胞的转移促进糖尿病性心肌病恶化
⑤ 外泌体缓解心肌梗死后的心脏损伤
⑥ 血清外泌体作为扩张型心肌病引起的急性心力衰竭的潜在生物标志物
(2) miRNA/LncRNA/CircRNA方向
① 内皮祖细胞外泌体携带miRNA促进深静脉血栓的溶解和再通
② 心肌缺血患者冠状血清外泌体通过miRNA介导某信号通路调节血管新生
③ 2型糖尿病患者的循环LncRNAs分析揭示影响葡萄糖代谢和胰岛β细胞功能的新基因
④ 外泌体某miRNA通过靶向PTEN促进心脏肥大和功能障碍
⑤ 外泌体某miRNA过表达促进间充质干细胞治疗脑出血的神经保护作用
⑥ CircRNA通过依赖于miRNA上调的MTP18表达介导心肌细胞死亡
(3) 干细胞分离外泌体方向
① BMSCs通过分泌负载某小RNA的外泌体来保护肾脏缺血再灌注损伤,某小RNA靶向BIP以在再灌注早期阶段抑制内质网应激
② 间充质干细胞外泌体递送某miRNA促进心肌梗死中的血管生成
③ 骨髓间充质干细胞的外泌体通过靶向CaMKII调节心脏干细胞中的氧化损伤
④ 梗死心脏中的恶劣微环境加速了移植的骨髓间充质干细胞损伤——受损心肌细胞衍生的外泌体的作用
⑤ 某miRAN过表达的ADSC外泌体治疗急性心肌缺血性损伤
(4) 巨噬细胞与外泌体方向
① 间充质基质细胞衍生的外泌体通过小RNA调节的巨噬细胞极化减轻心肌缺血再灌注损伤
② 脂肪来源的外泌体通过调节巨噬细胞源泡沫细胞形成和极化,发挥促进动脉粥样硬化作用
(5) 信号转导 + 外泌体方向
① 运动训练增强了Sirt1信号传导并减弱了D-半乳糖诱导衰老大鼠的心脏炎症
② 血清外泌体通过调节miR-21/PDCD4信号通路保护急性心肌梗死
③ MSC外泌体通过AMPK/Akt信号通路诱导心肌细胞自噬减轻心脏缺血复灌损伤
(6) 转录因子 + 外泌体方向
① 心脏中某微小RNA的过表达通过外泌体的转运,通过SNAP-25的转录后调节减弱海马突触小泡的胞吐作用
(7) 缺氧诱导 + 外泌体方向
① 缺氧MSC外泌体通过某miRNA发挥更好的心梗后心功能保护作用
② 缺氧诱导的间充质干细胞衍生的外泌体通过小RNA抑制心肌梗死细胞死亡促进心脏修复
③ 缺氧诱导心脏成纤维细胞的外泌体介导缺血后处理的心脏保护作用
(8) 铁死亡方向
① 雷帕霉素对心肌细胞铁死亡的保护作用。
② 葛根素通过减轻铁死亡预防因压力过大引起的心力衰竭。
(9) 细胞焦亡方向
① 大黄素通过抑制gasdermin d介导的心肌细胞焦亡减轻心肌缺血/再灌注损伤。
② 沉默长链非编码RNA Kcnq1ot1可减轻糖尿病性心肌病的焦亡和纤维化。
③ 通过下调FoxO3抑制NLRP3炎症介导的动脉粥样硬化内皮细胞凋亡。
④ 利拉鲁肽通过调节sirt1/nox4/ros通路减轻NLRP3炎症依赖性h9c2细胞焦亡。
 
3. 心血管内外科sci文献
(1) Qiao, L., et al. (2019). "microRNA-21-5p dysregulation in exosomes derived from heart failure patients impairs regenerative potential." J Clin Invest 130.  IF=13.251
(2) Zhao, J., et al. (2019). "Mesenchymal Stromal Cell-Derived Exosomes Attenuate Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury through miR-182-Regulated Macrophage Polarization." Cardiovasc Res.  IF=6.29
(3) Zhu, L.P., Tian, T., Wang, J.Y., He, J.N., Chen, T., Pan, M., Xu, L., Zhang, H.X., Qiu, X.T., Li, C.C., et al. (2018). Hypoxia-elicited mesenchymal stem cell-derived exosomes facilitates cardiac repair through miR-125b-mediated prevention of cell death in myocardial infarction. Theranostics.  IF=8.537
(4) Wang, C., Zhu, G., He, W., Yin, H., Lin, F., Gou, X., and Li, X. (2019). BMSCs protect against renal ischemia-reperfusion injury by secreting exosomes loaded with miR-199a-5p that target BIP to inhibit endoplasmic reticulum stress at the very early reperfusion stages. FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology, fj201801821R.  IF=5.595
(5) Chen, W. K., et al. (2018). "Exercise training augments Sirt1-signaling and attenuates cardiac inflammation in D-galactose induced-aging rats." Aging (Albany NY) 10(12): 4166-4174.  IF=5.179
(6) Zhang, H., et al. (2018). "MicroRNA-21 Overexpression Promotes the Neuroprotective Efficacy of Mesenchymal Stem Cells for Treatment of Intracerebral Hemorrhage." Front Neurol 9: 931.  IF=3.508
(7) Tong, Y., et al. (2018). "Exosome-Mediated Transfer of ACE (Angiotensin-Converting Enzyme) From Adventitial Fibroblasts of Spontaneously Hypertensive Rats Promotes Vascular Smooth Muscle Cell Migration." Hypertension 72(4): 881-888.  IF=6.823
(8) Wang, X., et al. (2018). "Engineered Exosomes With Ischemic Myocardium-Targeting Peptide for Targeted Therapy in Myocardial Infarction." J Am Heart Assoc 7(15): e008737.  IF=4.45
(9) Ma, T., et al. (2018). "MicroRNA-132, Delivered by Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes, Promote Angiogenesis in Myocardial Infarction." Stem Cells Int 2018: 3290372.  IF=3.989
(10) Luo, H., et al. (2018). "Exosomes/microvesicles microRNA-423-3p derived from cardiac fibroblasts mediates the cardioprotective effects of ischemic postconditioning." Cardiovasc Res.  IF=6.29
(11) Nie, X., et al. (2018). "miR-217 Promotes Cardiac Hypertrophy and Dysfunction by Targeting PTEN." Mol Ther Nucleic Acids 12: 254-266.  IF=5.66
(12) Hu, J., et al. (2018). "Exosomal Mst1 transfer from cardiac microvascular endothelial cells to cardiomyocytes deteriorates diabetic cardiomyopathy." Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis 1864(11): 3639-3649.  IF=5.108
(13) Sun, J., et al. (2018). "Endothelial progenitor cell-derived exosomes, loaded with miR-126, promoted deep vein thrombosis resolution and recanalization." Stem Cell Res Ther 9(1): 223.  IF=4.963
(14) Wang, Y., et al. (2018). "Exosomes Derived from miR-214-Enriched Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells Regulate Oxidative Damage in Cardiac Stem Cells by Targeting CaMKII." Oxid Med Cell Longev 2018: 4971261.  IF=4.936
(15) Li, H., et al. (2018). "Coronary Serum Exosomes Derived from Patients with Myocardial Ischemia Regulate Angiogenesis through the miR-939-mediated Nitric Oxide Signaling Pathway." Theranostics 8(8): 2079-2093.  IF=8.712
(16) Liu, J., et al. (2018). "miR-93-5p-Containing Exosomes Treatment Attenuates Acute Myocardial Infarction-Induced Myocardial Damage." Mol Ther Nucleic Acids 11: 103-115.  IF=6.392
(17) Wu, T., et al. (2018). "Serum Exosomal MiR-92b-5p as a Potential Biomarker for Acute Heart Failure Caused by Dilated Cardiomyopathy." Cell Physiol Biochem 46(5): 1939-1950.  IF=5.104
(18) Gu, H., et al. (2018). "Serum-Derived Extracellular Vesicles Protect Against Acute Myocardial Infarction by Regulating miR-21/PDCD4 Signaling Pathway." Front Physiol 9: 348.  IF=4.134
(19) Hu, M., etal. (2018). "The harsh microenvironment in infarcted heart acceleratestransplanted bone marrow mesenchymal stem cells injury: the role of injuredcardiomyocytes-derived exosomes." Cell Death Dis 9(3): 357.  IF=5.965
(20) Ruan, Y., et al. (2018). "Circulating LncRNAsAnalysis in Patients with Type 2 Diabetes Reveals Novel Genes InfluencingGlucose Metabolism and Islet beta-Cell Function." Cell Physiol Biochem46(1): 335-350.  IF=5.104
(21) Xie, Z., etal. (2018). "Adipose-Derived Exosomes Exert Proatherogenic Effects byRegulating Macrophage Foam Cell Formation and Polarization." J Am HeartAssoc 7(5).  IF=4.863
(22) Luo, Q., et al. (2017). "Exosomes fromMiR-126-Overexpressing Adscs Are Therapeutic in Relieving Acute MyocardialIschaemic Injury." Cell PhysiolBiochem 44(6): 2105-2116.  IF=5.104
(23) Zhu, J., et al. (2017). "Myocardial reparative functions of exosomes from mesenchymal stem cells are enhanced by hypoxia treatment of the cells via transferring microRNA-210 in an nSMase2-dependent way." Artif Cells Nanomed Biotechnol: 1-12. IF=5.605
(24) Liu, L., et al. (2017). "Exosomes Derived from Mesenchymal Stem Cells Rescue Myocardial Ischaemia/Reperfusion Injury by Inducing Cardiomyocyte Autophagy Via AMPK and Akt Pathways." Cell Physiol Biochem 43(1): 52-68. IF=5.104
(25) Baba Y, Higa JK, Shimada BK, Horiuchi KM, Suhara T, Kobayashi M, Woo JD, Aoyagi H, Marh KS, Kitaoka H, Matsui T. Protective effects of the mechanistic target of rapamycin against excess iron and ferroptosis in cardiomyocytes. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2018 Mar 1;314(3):H659-H668.
(26) Liu B, Zhao C, Li H, Chen X, Ding Y, Xu S. Puerarin protects against heart failure induced by pressure overload through mitigation of ferroptosis. Biochem Biophys Res Commun. 2018 Feb 26;497(1):233-240. 
(27) Ye B, Chen X, Dai S, Han J, Liang X, Lin S, Cai X, Huang Z, Huang W. Emodin alleviates myocardial ischemia/reperfusion injury by inhibiting gasdermin D-mediated pyroptosis in cardiomyocytes. Drug Des Devel Ther. 2019 Mar 25;13:975-990.
(28) Yang F, Qin Y, Lv J, Wang Y, Che H, Chen X, Jiang Y, Li A, Sun X, Yue E, Ren L, Li Y, Bai Y, Wang L. Silencing long non-coding RNA Kcnq1ot1 alleviates pyroptosis and fibrosis in diabetic cardiomyopathy Cell Death Dis. 2018 Sep 24;9(10):1000. 
(29) Li P, Zhong X, Li J, Liu H, Ma X, He R, Zhao Y. MicroRNA-30c-5p inhibits NLRP3 inflammasome-mediated endothelial cell pyroptosis through FOXO3 down-regulation in atherosclerosis. Biochem Biophys Res Commun. 2018 Sep 18;503(4):2833-2840.microRNA-30c-5p
(30) Chen A, Chen Z, Xia Y, Lu D, Yang X, Sun A, Zou Y, Qian J, Ge J.Liraglutide attenuates NLRP3 inflammasome-dependent pyroptosis via regulating SIRT1/NOX4/ROS pathway in H9c2 cells. Biochem Biophys Res Commun. 2018 May 5;499(2):267-272. 

嘉美实验常用研究方法
1. 研究对象:
  (1) 动物实验:构建动物模型,通过中、西药,小分子,病毒载体,外泌体,蛋白,抗体,手术,物理手段等等方法进行治疗。观察动物临床状况,收集动物标本进行病理检测,电镜,蛋白、基因检测,生化指标检测,测序芯片等检测。
  (2) 细胞实验:原代细胞,我们先进行原代细胞分离;细胞株进行细胞复苏,再根据实验分组进行预药干预、转染、低氧常氧、射线处理等各种细胞培养。最后进行各种实验检测:电镜、激光共聚焦检测、Hochest细胞染色流式细胞表型、CD分子检测、细胞周期检测、Transwell迁移与侵袭实验、细胞趋化实验细胞划痕(修复)、实验细胞克隆(集落)形成实验、小管形成实验、细胞粘附能力检测、细胞增殖/毒性MTT/CCK8实验、细胞线粒体膜电位MMP检测、细胞内钙离子检测、WB和PCR方法对各蛋白、基因检测等等。
  (3) 临床标本:医院客户收集临床标本,根据需求进行各种检测。
 
2. 细胞凋亡:
  (1) 早期凋亡(膜凋亡)检测:用流式细胞法,Annexin V/PI双染试剂盒进行检测。
  (2) 原位末端凋亡(Tunel)检测:用免疫组化及荧光方法,Tunel试剂盒进行检测。
  (3) 凋亡相关蛋白检测:用WB或者流式方法检测,有些蛋白会用到ELISA的方法。
 
3. 细胞焦亡:
  (1) 形态变化 
   ① 扫描电镜观察细胞形态
   ② 扫描电镜观察细胞形态:细胞发生焦亡时,细胞会发生肿胀,在细胞破裂之前,细胞上形成凸出物,之后细胞膜上形成孔隙,使细胞膜失去完整性,释放内容物,引起炎症反应,此时,细胞核位于细胞中央,随着形态学的改变,细胞核固缩,DNA断裂。
   ③ 免疫荧光染色(GSDMD/GSDME)
  (2) qPCR/Western Blot方法检测焦亡相关基因或蛋白Caspase-1,4,5,11,IL-1β,TNF-α,IL-6,IL-8,GSDMD,GSDME,Cleaved Caspase-1,3等的表达水平。
  (3) ELISA或Luminex或CBA多因子方法检测外周血或者细胞培养上清液种IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8等炎症因子的水平。
  (4) MTT法测定细胞活力
 
4. 铁死亡的检测
  (1)新陈代谢
   ①细胞活性:CCK-8;
   ②细胞内铁水平:可以使用PGSK探针检测,通过流式细胞术或共聚焦显微镜监测活细胞内铁含量的细胞膜透性染料,结果表明,在铁死亡的细胞中,PGSK的绿色荧光会减弱;
   ③活性氧的水平:通过C11-BODIPY探针检测,在铁死亡细胞中,探针会由红色转化为绿色;
   ④QPCR/Western Blot:检测细胞内与铁死亡相关的因子的变化,例如COX-2,ACSL4,PTGS2,NOX1,GPX4和FTH1等,其中COX-2,ACSL4,PTGS2和NOX1在铁死亡细胞中表达上调;GPX4和FTH1在铁死亡细胞中表达下调
  (2)形态观察
   ①透射电镜直接对细胞形态进行观察:细胞发生铁死亡时线粒体变小以及线粒体膜密度较大;
   ②线粒体膜电位检测:通过流式细胞仪收集TMRE阳性细胞的比例;
   ③线粒体形态观察:向细胞内转染LifeAct-GFP荧光蛋白,一定时间后通过有丝分裂追踪器观察线粒体的形态。
 
5. 自噬的检测
  (1) 细胞自噬过程的观察和检测方法
   ① 正常培养的细胞自噬活性很低,不适于观察,必须对自噬进行人工干预和调节。
   ② 细胞经诱导或抑制后,需对自噬过程进行观察和检测,常用的策略和技术有:
    1) 观察自噬体的形成;
    2) 在荧光显微镜下采用GFP-LC3融合蛋白来示踪自噬形成;
    3) 利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成;
    4) 检测长寿蛋白的批量降解;
    5) MDC(Monodansylcadaverine,单丹磺酰尸胺)染色;
    6) CellTrackerTM Green染色:主要用于双染色,但其能染所有的液泡,故也属于非特异性的。
  (2)在研究自噬相关蛋白时,需对其进行定位。由于自噬体与溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体关系密切,为了区别,常用到一些示踪蛋白在荧光显微镜下来共定位。
   ① Lamp-2:溶酶体膜蛋白,可用于监测自噬体与溶酶体融合。
   ② LysoTrackerTM 探针:有红或蓝色可选,显示所有酸性液泡。
   ③ pDsRed2-mito:载体,转染后表达一个融合蛋白(红色荧光蛋白+线粒体基质定位信号),可用来检测线粒体被自噬掉的程度(Mitophagy)。
   ④ MitoTraker探针:特异性显示活的线粒体,荧光在经过固定后还能保留。
   ⑤ Hsp60:定位与线粒体基质,细胞死亡时不会被释放。
   ⑥ Calreticulin(钙网织蛋白):内质网腔
  (3) 自噬相关蛋白和基因检测
   ① 抑制类通路相关蛋白基因检测
    1) Class I PI3K pathway (PI-phosphatidylinositol,磷脂酰肌醇)与IRS (Insulin receptor substrate) 结合,接受胰岛素受体传来的信号(血糖水平高抑制自噬)
    2) mTOR pathway(mammalian target of rapamycin)mTOR在人类中的同源基因是FRAP1(FK506 binding protein 12-rapamycin associated protein 1),是一个丝/苏氨酸蛋白激酶。能接受多种上游信号,如Class I PI3K、IGF-1/2、MAPK,能感受营养和能量的变化,rapamycin是最典型最常用的自噬激动剂。
  ② 激活类通路相关蛋白基因检测:Class III PI3K,结构上类似于Class I PI3K,但作用相反。
  ③ 自噬标志物蛋白检测:Beclin-1、Lamp-1、Lamp-2、LC3。
 
6.外泌体
(1) 外泌体分离
嘉美实验中心使用Thermo旗下Invitrogen公司的Total Exosome Isolation Reagent系类试剂盒分离外泌体。
① Total Exosome Isolation Reagent (from cell culture media)用于细胞的外泌体分离
② Total Exosome Isolation Reagent (from serum)用于血清的外泌体分离
③ Total Exosome Isolation Kit (from plasma)用于血浆的外泌体分离
④ Total Exosome Isolation Reagent (from urine)用于尿液的外泌体分离
⑤ Total Exosome Isolation Reagent (from other body fluids)用于体液的外泌体分离
(2)外泌体鉴定
① 电镜
 


② WB检测外泌体标志物
 
 
③ FCM流式检测外泌体标志物
 
相关文章
© 2017 北京嘉美臻元生物技术有限公司 保留所有权利 京ICP备10216606号-3