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彗星实验

一、彗星实验介绍
“彗星”实验又称单细胞凝胶电泳实验,是一种通过检测DNA链损伤来判别遗传毒性的技术。它能有效地检测并定量分析细胞中DNA单、双链缺口损伤的程度。当各种内源性和外源性DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时,其超螺旋结构受到破坏,在细胞裂解液作用下,细胞膜、核膜等膜结构受到破坏,细胞内的蛋白质、RNA以及其他成分均扩散到电解液中,而核DNA由于分子量太大不能进入凝胶而留在原位。在中性条件下,DNA片段可进入凝胶发生迁移,而在碱性电解质的作用下,DNA发生解螺旋,损伤的DNA断链及片段被释放出来。在电泳过程中,这些DNA断链及片段带会离开核DNA 向正极迁移形成“彗星”状图像,而未受损伤的DNA部分保持球形。DNA受损越严重,产生的断链和断片越多,长度也越大,在相同的电泳条件下迁移的DNA量就愈多,迁移的距离就愈长。通过测定DNA迁移部分的光密度或迁移长度就可以测定单个细胞DNA损伤程度,从而确定受试物的作用剂量与DNA损伤效应的关系。该法检测低浓度遗传毒物具有高灵敏性,研究的细胞不需处于有丝分裂期。同时,这种技术只需要少量细胞。
 
二、客户提供标本或者相关资料
1. 研究用细胞或组织;
2. 检测的指标;
3. 请客户提供DNA受损详细相关信息或相关文献。
 
三、单细胞凝胶电泳实验流程
1.细胞接种:单细胞凝胶电泳实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行单细胞凝胶电泳实验当天细胞密度应达到60%~80%覆盖;
2. DNA损伤处理;
3. 收集细胞,制备单细胞悬液;
4. 制备胶板;
5. 细胞裂解与电泳;
6. 中和与染色;
6. 荧光显微镜拍照,记录实验结果。        
 
四、最终结果
1. 阴性对照结果;
2. 具体试验流程(包括:实验步骤;主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号;试剂厂家、批号));
3. 原始实验图片及数据。 
 

 
 
五、相关要求
1、生长状况良好的细胞株,细胞特性,培养条件及相关注意事项;嘉美实验有的细胞可以酌情免费提供或者收取部分费用;
2、诱导细胞DNA损伤所需试剂、条件等相关背景资料;
 
六、交付结果
1. 具体实验报告(包括实验步骤和主要仪器及试剂说明);
2. 实验组和对照组单细胞凝胶电泳图。

具体实验咨询,请联系嘉美实验
 
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