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细胞线粒体膜电位MMP检测

一、细胞线粒体膜电位MMP检测介绍
1、大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关,其中线粒体跨膜电位(MMP)的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃,则细胞凋亡不可逆转。
 
2、JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位的理想荧光探针。JC-1染料表现出电势依赖性的积聚在线粒体内。正常线粒体内,JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物,聚合物发出强烈的红色荧光(Ex=585 nm, Em=590 nm);不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失,JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中,产生绿色荧光(Ex=514 nm, Em=529 nm)。因此颜色的变化非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。线粒体的去极化程度也可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。
 
3、JC-1染料的特点:
  1)  染料用途广:可用来检测各种细胞类型包括单核细胞和神经细胞,以及完整组织和纯化的线粒体;
  2)  染料特异性更高:与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123相比,对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化,对线粒体去极化检测的检测一致性更好;
  3)  红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化,不受线粒体大小,形状,密度的差异干扰;
  4)  检测灵敏度强,对细胞应激反应的微小异质性都能辨别。
 
4、JC-1分子结构:
 
二、细胞线粒体膜电位MMP检测实验流程
1、细胞培养;
2、用适当的方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性依照组合阳性对照组,收集细胞;
3、用PBS洗涤细胞三次,收集不多于1×106的细胞;
4、取100 μL 10×Incubation Buffer加900μL灭菌去离子水稀释成1×Incubation Buffer,混匀并预热至37℃;
5、吸取500 μL 1×Incubation Buffer,加入1μL JC-1,涡旋混匀配成JC-1工作液;
6、取500 μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮,37℃,5% CO2的培养箱中孵育15~20min;
7、室温离心(2000rpm,5min)收集细胞,用1×Incubation Buffer洗两次;
8、吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新悬浮细胞;
9、流式细胞仪检测,分析。
 
 
三、嘉美实验细胞趋化实验服务流程
1、客户提供
  1)生长良好的细胞;或者由嘉美实验代购细胞;嘉美实验室有的细胞,由嘉美实验室免费提供。
  2)提供详细实验方案;或者由嘉美实验代为设计实验方案,客户予以配合及确认。
 
2、交付内容
  实验报告:详细操作步骤、结果分析
更多的实验具体咨询,请联系嘉美实验
 

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