Hi,欢迎来到嘉美实验中心
公司文化|联系我们

lab-manager@jiamay.com400-000-7401

(扫一扫关注我们)

联系我们

电 话:400-000-7401

邮 箱:lab-manager@jiamay.com

地 址:北京市昌平区中东路5号院4号楼1809

邮 编:100012

细胞Transwell迁移与侵袭实验

一、嘉美实验细胞迁移实验介绍
1、实验简介:细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将研究的细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
 

 
2、实验材料
(1)Transwell chamber: 24-well, 8.0-μm pore membranes (Corning) 
(2)细胞培养相关试剂:无血清培养基,10%血清培养基,PBS,0.02%EDTA
(3)固定液:甲醇
(4)染色液:Giemsa染液
(5)封片剂:中性树胶
(6)其他:小镊子,棉棒,载玻片,盖玻片

3、操作步骤
(1)所有细胞培养试剂和Transwell chamber 放在37℃温育;
(2)待测细胞培养至对数生长期,消化细胞,用PBS和无血清培养基先后洗涤一次,用无血清培养基悬浮细胞,计数,调整浓度为2×105 /ml;
(3)在下室(即24孔板底部)加入600-800μl 含10%血清的培养基,上室加入100-150μl细胞悬液,继续在孵箱培养24小时;
(4)用镊子小心取出chamber,吸干上室液体,移到预先加入约800μl甲醇的孔中,室温固定30分钟;
(5)取出chamber,吸干上室固定液,移到预先加入约800μl Giemsa染液的孔中,室温染色15-30分钟;
(6)轻轻用清水冲洗浸泡数次,取出chamber,吸去上室液体,用湿棉棒小心擦去上室底部膜表面上的细胞;
(7)用小镊子小心揭下膜,底面朝上晾干,移至载玻片上用中性树胶封片;
(8)显微镜下取9个随机视野计数,统计结果。
 
4、注意事项
(1)根据待测细胞体积大小选择合适孔径的chamber。常用的为8.0-μm孔径(如AGS细胞),如果细胞体积较大可以考虑用10-μm孔径;
(2)根据待测细胞的迁移能力强弱调整细胞数和迁移时间。常规24-well chamber接种细胞数约为2≈5×104/well,迁移时间12≈36小时;
(3)由于Corning公司的24-Transwell内含12个独立的chamber,为了避免操作污染,每次实验可预先另准备一块24孔普通培养板(Corning);
(4)如果细胞迁移能力较弱,下室液体可用3T3细胞无血清培养24小时获得的上清加50μg/ml FN(Fibronectin),具体可查阅相关文献;
(5)细胞悬液加入膜中央,尽量保证液面水平;
(6)固定染色擦洗时动作小心,避免擦去膜底面的细胞。但一定要充分擦净膜表面上未迁移的细胞,以免影响读数。尤其是膜周边上可用细牙签或小镊子缠上湿棉花擦洗,但要小心避免将膜戳破;
(7)Chamber和膜上都无法标记,操作时应小心避免混淆实验组和对照组;
(8)充分晾干,避免残留水分导致镜下聚焦不一致。
 
 
二、嘉美实验细胞侵袭实验
1、实验材料
(1)Matrigel (BD 5mg/ml),-20℃保存
(2)其余材料同迁移实验

2、操作步骤
(1)Matrigel在4℃过夜融化;
(2)用4℃预冷的无血清培养基稀释Matrigel至终浓度1mg/ml,冰上操作;
(3)在chamber上室底部中央垂直加入100μl稀释后的Matrigel,37℃温育4-5小时使其干成胶状;
(4)后续步骤同迁移实验(1-8)。

3、注意事项
(1)Matrigel在过高或过低的温度均易凝固,因此操作所需枪头和离心管应提前在4℃预冷;
(2)铺胶时保证液面水平,胶的厚度均匀一致,切勿产生气泡;
(3)其他注意事项同迁移试验。
 
三、嘉美实验细胞侵袭迁移实验服务流程
1、服务流程
  1)Transwell小室制备
  2)制备细胞悬液
  3)接种细胞
  4)结果统计
 
2、客户提供
  1)生长良好的细胞;或者由嘉美实验代购细胞;嘉美实验室有的细胞,由嘉美实验室免费提供。
  2)提供详细实验方案;或者由嘉美实验代为设计实验方案,客户予以配合及确认。
 
3、交付内容
  实验报告:详细操作步骤、结果分析


更多具体实验咨询,请联系嘉美实验

© 2017 北京嘉美臻元生物技术有限公司 保留所有权利 京ICP备10216606号-3