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网状纤维(RF)染色

 

一、网状纤维(RF)染色简介
网状纤维(reticular fiber,RF)在疏松结缔组织中含量较少,纤维较细,有分支,彼此交织成网状。用浸银法可将纤维染成黑色,故又称嗜银纤维(argyrophilic fiber)。电镜观察,网状纤维具有等间距的横纹结构,其化学成分也是胶原蛋白,和胶原纤维相似。网状纤维的嗜银性是由于包在原纤维上的糖蛋白所致。

二、染色原理
氨银液被组织吸咐与组织中的蛋白结合,经甲醛还原成黑色的金属银沉积于组织内及表面。用氯化金调色后,再用硫代硫酸钠液洗去未还原的银盐,从而将组织内的网状纤维清晰地显示出来。

三、染色步骤
1、切片脱蜡至水,蒸馏水洗
2、用0.5%高锰酸钾氧化5min
3、自来水洗,继用蒸馏水洗
4、用2%草酸漂白切片2min
5、自来水洗,蒸馏水洗
6、2%硫酸铁铵媒染5min
7、水洗,蒸馏水洗
8、滴入氨性银溶液浸染3-5min
9、蒸馏水洗数次
10、10%甲醛液还原5-10min
11、水洗2min
12、用核固红染色10-15min
13、水洗10min,各级酒精脱水,常规透明,中性树胶封固
14、结果:网状纤维黑色,核红色,胶原纤维黄棕色。

三、样本说明
1、石蜡切片
取材:1、组织离体后需及时固定;2、组织标本不宜过大、过厚。
固定:1、固定液:10%福尔马林(4%多聚甲醛)或10%中性甲醛;2、用量:一般固定液的量与组织体积比为10:1~20:1;3、固定:适宜的固定时间,主要根据材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存:切片经60℃烤片3-5小时后,可于常温或4℃干燥保存。
 
2、冰冻切片
取材:取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。
固定:样本冰冻切片后,应立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。
保存:固定好的切片自然风干,密封后置于-80℃、-20℃保存,尽快用于后续实验。
 
3、细胞块石蜡切片
细胞量较多的样品,可离心分离所需细胞,用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块,然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。
 
4、细胞爬片
在孔板里做的细胞爬片,爬片取出后,用PBS洗涤2次(根据研究目的,PBS洗涤可选择不做),用4%多聚甲醛4℃固定15分钟,将表面液体吹干,置于-20℃保存。若在短时间内即开展实验,可在加固定液后,于4℃冰箱中放置一段时间。
 
5、细胞涂片细胞涂片常用的固定液有95%酒精(最为常用)、酒精-冰醋酸液、乙醚-酒精液和Carney’s液等。 
 
四、注意事项
1、常用的固定液为中性甲醛和4%多聚甲醛,能使大多数抗原保存良好,适用于免疫组织化学。
2、病理实验切片最好是防脱片,以免实验过程中出现掉片。若客户提供切片,应告知切片有无防脱处理。
3、骨组织、皮肤组织或脂肪含量较高的样本,实验过程中有较高的掉片几率。
4、客户可提供组织块(以10%福尔马林、4%多聚甲醛或10%中性甲醛固定,如组织块极小请事先说明)、蜡块或切片(使用免疫组化专用切片,以避免实验过程中掉片)
5、待检测蛋白的种属、实验分组情况及实验背景资料、其他具体要求等需事先说明。
6、若客户提供骨组织或钙化程度较高的组织进行实验,需进行脱钙处理。
7、浸泡在固定液中的组织样本,在运输中容器需密封,防止破碎、渗漏。

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