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透射电镜(TEM)检测服务


 
一、实验技术简介
透射电镜,即透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,简称TEM),通常称作电子显微镜或电镜(EM),是使用最为广泛的一类电镜。结构的研究从尺度方面可以分为宏观研究和微观研究,而生命科学的研究主要集中在微观方面,从个体水平到分子水平的研究分辨率在0.2mm以上可以用用肉眼观察,分辨率在0.2mm-0.2um之间可以用光镜观察,分辨率在0.2um-0.2nm之间就一定要用电子显微镜(简称电镜)技术,而细胞内部结构及相关细胞器多数在0.2um-0.2nm之间,所以这个尺度又称为亚细胞结构,而细胞结构的变化主要表现在亚细胞水平,这种变化与之对应的功能变化也最敏感,所以生命科学的很多问题都集中在这个尺度范围内,那么电镜就成为这个尺度研究的主要工具。
 
实验技术原理:由照明部分提供的有一定孔径角和强度的电子束平行地投影到处于物镜物平面处的样品上,通过样品和物镜的电子束在物镜后焦面上形成衍射振幅极大值,即第一幅衍射谱。这些衍射束在物镜的象平面上相互干涉形成第一幅反映试样为微区特征的电子图象。通过聚焦(调节物镜激磁电流),使物镜的象平面与中间镜的物平面相一致,中间镜的象平面与投影镜的物平面相一致,投影镜的象平面与荧光屏相一致,这样在荧光屏上就察观到一幅经物镜、中间镜和投影镜放大后有一定衬度和放大倍数的电子图象。由于试样各微区的厚度、原子序数、晶体结构或晶体取向不同,通过试样和物镜的电子束强度产生差异,因而在荧光屏上显现出由暗亮差别所反映出的试样微区特征的显微电子图象。
 
二、实验操作流程
1、取材:组织块小于1立方毫米
2、固定
3、脱水
4、包埋
5、超薄切片机切片70nm
6、3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
7、透射电镜观察,拍片
 
 
三、实验注意事项

1、客户提供
  1)细胞,数量要求:10^6次方以上。生长在培养皿或培养板上细胞取材,若是悬浮的细胞将细胞转移到尖底 EP管里直接离心,贴壁细胞就先倒出培养液,用胰蛋白酶消化或用细胞刮刮下,而后带培养液一起低速离心,800-1200 转/分钟,离心 5-10 分钟使细胞沉淀成团,离心完后倒出培养液,沿壁缓慢加入电镜固定液(1.5%-2.5%中性戊二醛),注意不要把细胞团打散。4℃下固定 15 分钟或以上再送检。若细胞团太小,注意要用1ml 甚至 0.5ml 尖底 EP 管来进行固定、保存。
 
  2)肌肉:观察纵切面时沿着肌束方向,用锋利的刀片或剪刀在取出的组织一边取出 1-3 条细长的肌束,横截面约 1mm*1mm,投入到 2-8℃的电镜固定液(2.5%中性戊二醛)里。若有条件,为防止肌肉收缩变形,可将取出的肌束贴在载玻片毛玻璃一侧,使其略微伸展。再将贴好标本的载玻片放入戊二醛中进行固定。若无,则可取出长条状组织后,垂直缓慢放入固定液中,悬空在固定液里稍等 3 秒再放入。
 
  3)植物、昆虫等密度比固定液低的样品:必须先用针筒或抽真空仪器先抽气,再使标本沉入固定液中。
 
2、交付标准:
  1)扫描照片、读片分析
  2)完整项目报告(材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果)

3、其他
  1)组织从生物活体取下来以后,需要立即处理,否则由于细胞内部的各种酶的作用,出现细胞自溶现象,还有可能被污染,所以必须做到快,小,准,冷(0-4摄氏度)。
  2)超薄切片的切片面积最大不能超过0.5mm×0.3mm,比较难切的植物样品要求切片面积更小。
  3)檬酸铅染液极易和空气中的二氧化碳反应形成不溶解的黑色颗粒,污染切片。柠檬酸铅染液一定要现用相配,所用的双蒸水一定要煮沸除去二氧化。

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