Hi,欢迎来到嘉美实验中心
公司文化|联系我们

lab-manager@jiamay.com400-000-7401

(扫一扫关注我们)

联系我们

电 话:400-000-7401

邮 箱:lab-manager@jiamay.com

地 址:北京市昌平区中东路5号院4号楼1809

邮 编:100012

天狼猩红(Sirius Red)染色


一、天狼猩红(Sirius Red)染色简介
利用胶原蛋白聚合及其缠绕螺旋排列不同的特点,使用天狼星红苦味酸染色法,在偏振光显微镜下,可以根据双折光性和着色的不同,分别显示出四型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)胶原纤维。区分并定量这四种胶原纤维,对于研究病变的发生机理和演变过程有一定的意义。

二、试剂配制
1、天狼星红-饱和苦味酸液:0.5%天狼星红10ml,苦味酸饱和水溶液90ml。
2、天青石蓝液:天青石蓝B 1.25g,铁明矾1.25g,蒸馏水250ml。溶解煮沸,冷却后过滤,加入甘油30ml,然后再加入浓硫酸0.5ml(硫酸一定要后加入)。

三、染色步骤
1、石蜡切片脱蜡至水。
2、天青石蓝液5~10min
3、蒸馏水冲洗3次
4、天狼星红饱和苦味酸液15~30min(可用Harris苏木素液淡染细胞核)
5、无水乙醇分化与脱水。
6、 二甲苯透明、光学树胶封固
7、结果:
  1)普通光镜观察:胶原纤维呈红色,细胞核呈绿色,其他成分呈黄色。
  2)偏振光显微镜下观察:
  3)Ⅰ型胶原纤维:红色或黄色,排列紧密,具强双折光性
  4)Ⅱ型胶原纤维:多种色彩,疏松网状、弱双折光性
  5)Ⅲ型胶原纤维:绿色、细纤维、弱双折光性
  6、Ⅳ型胶原纤维:淡黄色、弱双折光性(基膜成分)

四、样本说明
1、石蜡切片
取材:1、组织离体后需及时固定;2、组织标本不宜过大、过厚。
固定:1、固定液:10%福尔马林(4%多聚甲醛)或10%中性甲醛;2、用量:一般固定液的量与组织体积比为10:1~20:1;3、固定:适宜的固定时间,主要根据材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存:切片经60℃烤片3-5小时后,可于常温或4℃干燥保存。
 
2、冰冻切片
取材:取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。
固定:样本冰冻切片后,应立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。
保存:固定好的切片自然风干,密封后置于-80℃、-20℃保存,尽快用于后续实验。
 
3、细胞块石蜡切片
细胞量较多的样品,可离心分离所需细胞,用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块,然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。
 
4、细胞爬片
在孔板里做的细胞爬片,爬片取出后,用PBS洗涤2次(根据研究目的,PBS洗涤可选择不做),用4%多聚甲醛4℃固定15分钟,将表面液体吹干,置于-20℃保存。若在短时间内即开展实验,可在加固定液后,于4℃冰箱中放置一段时间。
 
5、细胞涂片
细胞涂片常用的固定液有95%酒精(最为常用)、酒精-冰醋酸液、乙醚-酒精液和Carney’s液等。 
 
五、免疫组化实验注意事项
1、常用的固定液为中性甲醛和4%多聚甲醛,能使大多数抗原保存良好,适用于免疫组织化学。
2、病理实验切片最好是防脱片,以免实验过程中出现掉片。若客户提供切片,应告知切片有无防脱处理。
3、骨组织、皮肤组织或脂肪含量较高的样本,实验过程中有较高的掉片几率。
4、客户可提供组织块(以10%福尔马林、4%多聚甲醛或10%中性甲醛固定,如组织块极小请事先说明)、蜡块或切片(使用免疫组化专用切片,以避免实验过程中掉片)
5、待检测蛋白的种属、实验分组情况及实验背景资料、其他具体要求等需事先说明。
6、若客户提供骨组织或钙化程度较高的组织进行实验,需进行脱钙处理。
7、浸泡在固定液中的组织样本,在运输中容器需密封,防止破碎、渗漏。

更多实验咨询,请联系嘉美实验。
 
© 2017 北京嘉美臻元生物技术有限公司 保留所有权利 京ICP备10216606号-3