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神经元尼氏(Nissl)染色

 

 
一、神经元尼氏(Nissl)染色介绍
尼氏体为嗜碱性物质,又称嗜染质,光镜下呈斑块状或细粒状散在均匀分布。电镜下,尼氏体由大量平行排列的粗面内质网和其间的游离核糖体组成。尼氏体是神经元胞体细胞质的特征性结构之一,神经元胞质另外一特征性结构为神经原纤维。Franna Nissl (1860-1919) 1892年创立了Nissl染色法,以发现Nissl小体和Nissl变性而闻名。常用的碱性染料有Cresyl violet (焦油紫,甲酚紫,克紫);Thionine (硫荲);Tolridine blue (甲苯胺蓝)等。

二、试剂配制
1%甲苯胺蓝液:甲苯胺蓝1g,蒸馏水100ml,先用50ml蒸馏水溶解甲苯胺蓝,然后加蒸馏水至100ml,过滤后使用。

三、染色步骤(甲苯胺蓝染色法)
1、石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
2、在予热60℃的1%甲苯胺蓝液40min。
3、蒸馏水洗。
4、70%和80% 酒精浸洗。
5、95%乙醇分化,显微镜下控制分色,清晰显示尼氏小体为止,背景淡蓝色为宜。
6、无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
7、结果:尼氏小体-紫蓝色,细胞核-蓝色。
 
四、样本说明
1、石蜡切片
取材:1、组织离体后需及时固定;2、组织标本不宜过大、过厚。
固定:1、固定液:10%福尔马林(4%多聚甲醛)或10%中性甲醛;2、用量:一般固定液的量与组织体积比为10:1~20:1;3、固定:适宜的固定时间,主要根据材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存:切片经60℃烤片3-5小时后,可于常温或4℃干燥保存。
 
2、冰冻切片
取材:取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。
固定:样本冰冻切片后,应立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。
保存:固定好的切片自然风干,密封后置于-80℃、-20℃保存,尽快用于后续实验。
 
3、细胞块石蜡切片
细胞量较多的样品,可离心分离所需细胞,用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块,然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。
 
4、细胞爬片
在孔板里做的细胞爬片,爬片取出后,用PBS洗涤2次(根据研究目的,PBS洗涤可选择不做),用4%多聚甲醛4℃固定15分钟,将表面液体吹干,置于-20℃保存。若在短时间内即开展实验,可在加固定液后,于4℃冰箱中放置一段时间。
 
5、细胞涂片细胞涂片常用的固定液有95%酒精(最为常用)、酒精-冰醋酸液、乙醚-酒精液和Carney’s液等。 
 
五、注意事项
1、常用的固定液为中性甲醛和4%多聚甲醛,能使大多数抗原保存良好,适用于免疫组织化学。
2、病理实验切片最好是防脱片,以免实验过程中出现掉片。若客户提供切片,应告知切片有无防脱处理。
3、骨组织、皮肤组织或脂肪含量较高的样本,实验过程中有较高的掉片几率。
4、客户可提供组织块(以10%福尔马林、4%多聚甲醛或10%中性甲醛固定,如组织块极小请事先说明)、蜡块或切片(使用免疫组化专用切片,以避免实验过程中掉片)
5、待检测蛋白的种属、实验分组情况及实验背景资料、其他具体要求等需事先说明。
6、若客户提供骨组织或钙化程度较高的组织进行实验,需进行脱钙处理。
7、浸泡在固定液中的组织样本,在运输中容器需密封,防止破碎、渗漏。

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