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马松(Masson)三色染色病理服务

 

一、马松(Masson)三色染色简介
马松(Masson)三色染色是结缔组织染色中最经典的一种方法,是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理不阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关:分子的大小由分子量来体现,小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织;而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。

二、染色步骤
1、石蜡切片脱蜡至水
2、铬化处理或去汞盐沉淀(甲醛固定的组织此步可略)
3、依次自来水和蒸馏水洗
4、用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min
5、充分水洗,如过染可盐酸酒精分化
6、蒸馏水洗
7、用Masson 丽春红酸性复红液5-10min。
8、以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻
9、1%磷钼酸水溶液分化3-5min
10、不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min
11、以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻
12、95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固
13、结果:胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色),胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色
 
三、样本说明
1、石蜡切片
取材:1、组织离体后需及时固定;2、组织标本不宜过大、过厚。
固定:1、固定液:10%福尔马林(4%多聚甲醛)或10%中性甲醛;2、用量:一般固定液的量与组织体积比为10:1~20:1;3、固定:适宜的固定时间,主要根据材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存:切片经60℃烤片3-5小时后,可于常温或4℃干燥保存。

2、冰冻切片
取材:取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。
固定:样本冰冻切片后,应立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。
保存:固定好的切片自然风干,密封后置于-80℃、-20℃保存,尽快用于后续实验。

3、细胞块石蜡切片
细胞量较多的样品,可离心分离所需细胞,用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块,然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。

4、细胞爬片
在孔板里做的细胞爬片,爬片取出后,用PBS洗涤2次(根据研究目的,PBS洗涤可选择不做),用4%多聚甲醛4℃固定15分钟,将表面液体吹干,置于-20℃保存。若在短时间内即开展实验,可在加固定液后,于4℃冰箱中放置一段时间。

5、细胞涂片
细胞涂片常用的固定液有95%酒精(最为常用)、酒精-冰醋酸液、乙醚-酒精液和Carney’s液等。 
 
四、注意事项
1、常用的固定液为中性甲醛和4%多聚甲醛,能使大多数抗原保存良好。
2、病理实验切片最好是防脱片,以免实验过程中出现掉片。若客户提供切片,应告知切片有无防脱处理。
3、骨组织、皮肤组织或脂肪含量较高的样本,实验过程中有较高的掉片几率。
4、客户可提供组织块(以10%福尔马林、4%多聚甲醛或10%中性甲醛固定,如组织块极小请事先说明)、蜡块或切片(使用免疫组化专用切片,以避免实验过程中掉片)
5、待检测蛋白的种属、实验分组情况及实验背景资料、其他具体要求等需事先说明。
6、若客户提供骨组织或钙化程度较高的组织进行实验,需进行脱钙处理。
7、浸泡在固定液中的组织样本,在运输中容器需密封,防止破碎、渗漏。

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